Die Trennung hochmolekularer Verbindungen ist unter isokratischen Bedingungen sehr schwierig, wenn überhaupt möglich, und erfordert eine Gradientenelution. Die Theorie der Gradientenelution für kleine Moleküle ist gut etabliert; ihre Anwendung auf Umkehrphasen-Gradiententrennungen von Biopolymeren ist jedoch aufgrund spezifischer Probleme wie langsamer Diffusion, begrenzter Zugänglichkeit der stationären Phase für größere Moleküle oder möglicher Konformationsänderungen der Probe während der Elution nicht einfach. Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie wurde verwendet, um das Umkehrphasen-Chromatographieverhalten verschiedener Proteine zu untersuchen. Unter Verwendung eines Wasser/organisches Lösungsmittel/Trifluoressigsäure-Systems wurde der Einfluss der Versuchsparameter untersucht; die chromatographischen Ergebnisse verschiedener stationärer Phasen waren vergleichbar.