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O aparecimento de novas beta-lactamases, como a ¿-lactamase de espetro alargado (ESBL) e a metalo ¿-lactamase (MBL), é um mecanismo importante através do qual as bactérias patogénicas desenvolvem resistência aos beta-lactâmicos. Trata-se de uma preocupação global, uma vez que se sabe que dificultam o tratamento de infecções relacionadas com bactérias. O objetivo desta investigação foi determinar fenotipicamente a ocorrência de bactérias Gram-negativas produtoras de ESBL e MBL a partir de isolados clínicos. A ESBL foi detectada em 7,5% de Escherichia coli e 33,3% de Klebsiella pneumoniae. Nenhum dos isolados de P. aeruginosa no nosso estudo apresentou produção de ESBL pelo método do teste de sinergia de disco duplo (DDST). O teste de potenciação em disco detectou MBL em 12,5% de isolados de E. coli, 15,4% de Klebsiella pneumoniae e 10% de P. aeruginosa, enquanto o teste de Hodges modificado também detectou MBL em 12,5% de isolados de Escherichia coli, 7,7% de Klebsiella pneumoniae e 15% de Pseudomonas aeruginosa. O nosso estudo revela que as bactérias Gram-negativas de origem clínica produzem ESBL e MBL. A deteção de ESBL e MBL é crucial, uma vez que ajudará os médicos a prescrever a terapia adequada aos doentes afectados. A utilização racional de antibióticos é vital para controlar os micróbios resistentes.