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Il coniugato acido nalidixico-triptofano è stato sintetizzato accoppiando l'acido nalidixico con il cloridrato di estere metilico di glicina e caratterizzato da punto di fusione, cromatografia su strato sottile, valore RM, microscopia elettronica a scansione, studio di diffrazione dei raggi X e cromatografia liquida ad alte prestazioni. La struttura del profarmaco è stata confermata da tecniche analitiche, analisi elementare, spettroscopia infrarossa a trasformata di Fourier, risonanza magnetica nucleare a trasformata di Fourier e spettroscopia di massa. Gli studi di preformulazione hanno rivelato una maggiore solubilità acquosa con un cambiamento non significativo nella lipofilia del coniugato acido nalidixico-triptofano rispetto all'acido nalidixico. La reversione in vitro ha confermato che la reversione del profarmaco non era significativa nell'ambiente gastrico, quindi l'obiettivo di bypassare il GIT senza alcun rilascio di farmaco libero è stato raggiunto. Tuttavia il 67,83% di reversione del coniugato acido Nalidixico-triptofano in acido Nalidixico è stato osservato in tampone fosfato pH 6,8 in presenza del 20% w/v di materia fecale fresca di ratto a causa dell'idrolisi del legame amidico da parte dell'enzima amidasi secreto dalla microflora colonica.