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La pneumocystis es una infección oportunista que afecta principalmente a pacientes inmaduros. La introducción de la biología molecular en el diagnóstico de la pneumocystis ha mejorado la sensibilidad de la detección del patógeno. El objetivo de nuestro estudio es mostrar la contribución de la PCR en tiempo real en comparación con las técnicas de tinción. Nuestro estudio es retrospectivo (enero 2022-agosto 2023), e incluye 6 casos de pneumocystis. En 4 casos (67%), se detectaron coinfecciones por Pneumocystis jirovecii en asociación con VIH, CMV y SARS-CoV-2. En 1 caso (17%) se observó coinfección por Mycobacterium tuberculosis. La tinción convencional con MGG y Gomori Grocott modificado con Musto fue negativa en todos los casos. Sin embargo, el análisis por PCR en tiempo real arrojó resultados positivos en todas las muestras, lo que demuestra una sensibilidad del 100%. Los niveles de carga parasitaria oscilaron entre 10 y106 copias/mL. La PCR cuantitativa es una técnica muy sensible, con menos riesgo de contaminación, y ayuda a los clínicos a distinguir entre colonización e infección.