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O presente estudo teve por objetivo avaliar parâmetros de motilidade e viabilidade in vitro na diluição do crioprotetor dimetilformamida a 5% pós-descongelação para concentrações de 2,5 e 1,25%, mediante utilização de dois diluentes comerciais adicionados junto ao sêmen de eqüino criopreservado. Após a descongelação as amostras foram diluídas com a finalidade de manter as concentrações finais (2,5 e 1,25%) de crioprotetor, utilizando-se dois diluentes comerciais (FR4® e Botu-Crio®) em dois tempos: inicial (Ti) e final (Tf). Foram utilizadas 13 amostras de ejaculados distintos de cinco garanhões de raças nacionais. Os parâmetros de motilidade foram observados através da análise computadorizada e os de integridade de membrana plasmática pela microscopia de epifluorescência. Verificou-se melhora nos parâmetros de motilidade total e progressiva dos espermatozóides, no tempo final (P 0,05, entre os tratamentos quanto à a integridade de membrana plasmática.