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La séparation des composés à haut poids moléculaire est très difficile, voire impossible, dans des conditions isocratiques, et nécessite une élution par gradient. La théorie de l'élution par gradient pour les petites molécules est bien établie ; cependant, ses applications aux séparations par gradient en phase inverse des biopolymères ne sont pas simples en raison de problèmes spécifiques, tels que la diffusion lente, l'accessibilité limitée de la phase stationnaire pour les molécules plus grosses ou les changements de conformation possibles de l'échantillon pendant l'élution. La chromatographie liquide haute performance a été utilisée pour étudier le comportement chromatographique en phase inverse de différentes protéines. En utilisant un système eau/solvant organique/acide trifluoroacétique, l'influence des paramètres expérimentaux a été examinée ; les résultats chromatographiques obtenus à partir de différents supports de phase stationnaire étaient comparables.