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La presente indagine è stata progettata con l'obiettivo di formulare film di Chitosano (CH) mediante reticolazione con citrato di sodio (Nacit), tripolifosfato di sodio (NaTPP) o condroitinsolfato di condroitina (CS) che devono essere in grado di simulare la permeazione in vitro del farmaco polare modello, 5-Fluorouracile (5-FU) e farmaco non polare, Indometacina (INDO) attraverso il ratto/coniglio o l'epidermide umana. Il design di ottimizzazione è stato impiegato per identificare e ottimizzare varie variabili di processo e di formulazione in modo significativo (p<0,05) che influenzano la permeazione di entrambi i farmaci attraverso questi film. Inoltre, i risultati sono stati valutati per l'effetto della densità di cross linking sulla permeazione in vitro utilizzando l'analisi spettroscopica di assorbimento atomico per Na+, DSC e analisi spettroscopica IR. La permeazione in vitro sia di 5-FU che di INDO attraverso formulazioni di film ottimizzati di film reticolati con CH-NaTPP, CH-Nacit o CH-CS è stata trovata paragonabile a quella ottenuta attraverso fogli epidermici di ratto, coniglio e umani. Questi risultati indicano che questi film ottimizzati di CH hanno un potenziale da sviluppare come sostituto dei fogli epidermici di cadaveri umani e animali per studi preliminari di permeazione in vitro.